120W一针CAR-T | 实体瘤进展

1.CAR-T 细胞疗法

CAR-T细胞-结构

嵌合抗原受体作为机体组织中的一种融合蛋白，其中包含了抗原识别区、Ｔ细胞刺激区以及跨膜区等多个结构区域，其中，抗原识别区能够和肿瘤表面的抗原实现特异性结合、识别等，尤其是进行非组织相容 性复合物有效识别以及高亲和力表现均比较突出；嵌合抗原受体的 Ｔ细胞刺激区具有信号转导作用，其作用实现主要以 Ｔ细胞受体复合物为来源支持；跨膜区则是实现抗原识别区与 Ｔ 细胞刺激区有效连接的重要区域，在 Ｔ细胞活化上具有十分重要的作用。同时由于CAR-T细胞与趋化因子受体的连接关系，能够使其直接向肿瘤周围定向转移，达到靶向辐射与杀伤控制效果。

CAR-T细胞治疗- 机制

CAR-T细胞治疗方法是一种最新型细胞疗法，它在进行血液恶性细胞治疗中，是利用自身的免疫细胞进行癌变细胞清除，以达到相应的恶性细胞治疗和控制目的。将癌症患者体内的T细胞分离出来，通过基因克隆技术对具有免疫球蛋白（Ig）的抗原结合区的 T 细胞受体的进行基因改造， 给T细胞装上识别癌细胞表面抗原的“嵌合抗原受体”（CAR），使其重新恢复抗击癌细胞的功能，然后再把它们输回体内去对抗癌细胞，以达到治疗癌症的目的。

第一代CAR以单个胞内信号组分分子结构形式为主，即CD３ζ或 ＦｅεＲＩγ，它在Ｔ细胞增殖上的作用时间较短，并且只能实现少量的细胞因子分泌刺激，在机体存活的时间较短，对肿瘤细胞的抑制作用较弱。

第二代与第三代嵌抗原受体细胞免疫疗法中分别增加了CA27和 CD137等共刺激分子以通过对 Ｔ 细胞存活时间的延长，促进其增殖能力提升。

第四代CAR称为宇宙级的细胞因子介导杀手，是在第三代的基础上引入细胞因子受体结构域或细胞因子基因以及共刺激配体，从而实现更强的T细胞增殖以及杀伤性物质的释放，以实现更强疗效。第四代CAR-T被设计成将在CAR 与靶向抗原结合时能够释放改造基因的产品到肿瘤组织中。免疫调节分子如促炎症、细胞因子和酶的局部转移，使得 T 细胞浆免疫抑制肿瘤微环境转化为免疫耐受性肿瘤微环境。一种经常在 CAR-T 细胞中被过度表达的细胞因子是 IL-12，它是一个非常有效的分子可以增强 T 细胞分泌 IFNy、granzymeB 和穿孔素perforin；并雇佣 NK 细胞去消除 CAR 不能识别的肿瘤细胞。与传统的 CAR 相比，IL-12 过表达的CAR-T 细胞在临床前的模型中表现出增强的抗肿瘤和扩增效果，尤其是在实体瘤模型中。

第五代CAR即通用型CAR-T，是指从健康志愿者获取T细胞并进行基因编辑敲除相关基因以及转入CAR基因后制成的CAR-T细胞，不需要从患者体内获取T细胞进行定制。最主要的优势在于不需要从患者体内获取T细胞进行定制，而是可以做到现货供应（off-the-sheff），节约时间和治疗花费。

CAR-T细胞 - 制备方法

根据有关研究可知，基因转染过程中，慢病毒以及逆转录病毒均被作为重要的载体因子进行应用。其中，慢病毒作为一种基因转染的载体，由于其转染效率较高，并且对CAR的长期与高效表达具有十分积极的作用和影响，因此，在分裂细胞与非分裂细胞中均有应用，且使用范围十分广泛。除病毒在基因转染中的载体作用及其应用研究外，非病毒转染及其有关技术在具体实践中也有应用，最为突出的例子如电转染等。值得注意的是，综合当前对基因转染的各种技术与方法研究其中，RNA电穿孔方法作为一种不需要进行基因整合的技术手段，其在实际应用中能够在 Ｔ细胞中进行表达的持续时间可达到一周以上，并且利用ｍRNA进行转染制备的CAR-T细胞，在机体中的作用效应时间相对较短，对肿瘤细胞进行杀灭的同时，还不会导致肿瘤溶解综合征等发生，也不存在大量 Ｔ细胞增殖问题，因此，在实际应用中引起细胞因子风暴的可能性相对较低，具有较高的安全性。当前，采用 ｍRNA转染制备的CAR-T细胞进行恶性实体肿瘤的治疗应用，在一些实践中已经得到推广，并且存在较好的抗肿瘤作用和效应。在进行CAR-T细胞的制备中，趋化因子对Ｔ细胞的迁移发展也具有重要的驱使作用，比如. CAR-T细胞中的特定趋化因子及其受体表达，像 C C、ＣXCR２趋化因子的受体2B等，对 Ｔ 细胞向着肿瘤组织的迁移变化就具有重要的帮助作用

CAR-T细胞-给药途径研究

CAR-T细胞在血液恶性肿瘤治疗中应用，其使用剂量以及给药途径，对治疗应用的效果及其安全性等有着 重要的影响。其 中，根 据 对ＣＡＲ－Ｔ细胞治疗血液恶性肿瘤的各研究分析，全 身 给 药（即 静 脉 注 射给药）在各种给药途径中最为简单、易 操 作，且十分受临床欢迎。

也有临床研究证实，采用瘤体内注射给药以及腹腔内注射的局部给药方式进行治疗应用，均能够取得较好的作用和效果，且一些研究还认为该作用效果和肿瘤组织内 Ｔ细胞数量的增加存在着密切的关系

CAR-T细胞疗法-实体瘤进展

与血液瘤不同的是，目前已知用来治疗实体瘤的靶点都是肿瘤相关性抗原 ( tumor-associated anti-gen，TAA) 而非肿瘤特异性抗原 ( tumor specific antigen，TSA) ． 肿瘤相关性抗原也同样会在正常的组织中表达，因而存在潜在的脱靶风险，这也是 CAR-T 治疗应用实体瘤靶向治疗时的一大难题, 实体瘤组织与健康组织在这些靶点上存在表达量上的差异，通过基因编辑的 CAR-T 细胞可以对这些高表达某一抗原的细胞具有优先杀伤性． 因此在靶点的选择上通常需要一个过度表达而相对非特异性的表面抗原，例如表皮生长因子受体Ⅲ突变体 ( epidermal growth factor receptor variant Ⅲ，EGFRvⅢ) 因此 CAR-T 技术在应对实体瘤方面首先依赖于靶点的慎重选择．在胶质细胞瘤中，EGFRvⅢ在很多病例中存在高表达，约占 30%; 类似的还有 IL13Rα2，占比约44%。 因此在针对胶质细胞瘤的治疗策略上，EGFRvⅢ及 IL13Rα2 都是具有开发潜力的靶点． 有若干临床 I 期及临床 Ⅱ 期的实验评估 EGFRv Ⅲ CAR 在治疗恶性神经胶质瘤的安全性和效果． IL13Rα2-CAR 的临床 I 期项目对 IL13Rα2CAR 对脑瘤治疗效果进行评定，其它诸如神经外胚层 胶质瘤中高表达的 GD2及乳腺癌的中高表达的 HER-2，都是目前 CAR-T 技术靶向的实体瘤靶点，并有对应的临床实验正在展开以评估安全性和有效性。

2021年9月23日，杜红伟团队在Nature Cancer杂志上发表了文章Dual-targeting CAR-T cells with optimal co-stimulation and metabolic fitness enhance antitumor activity and prevent escape in solid tumors ，报道了重组CD28和4-1BB双共刺激分子的协同共刺激效应显著增强CAR-T在实体瘤中的疗效。

研究结果表明：携带双重共刺激分子共享一个CD3ζ的双靶点CAR-T”构建策略，能够成功整合CD28和4-1BB两个共刺激分子的优点，为CAR-T提供协同共刺激效应，从而使CAR-T既能被最优激活，快速杀伤肿瘤细胞，同时维持更好的分裂增殖潜力和长期存活能力；并能克服肿瘤抗原异质性，从而显著增强CAR-T在实体肿瘤中的抗肿瘤效果。

总之，新技术的到来让更多患者看到曙光，希望未来CAR-T技术能展现更高安全性，有效性。

专家介绍

王从俊，主任医师，医学博士，博士后，副教授，留美访问学者，上海交通大学医学院附属仁济医院胆胰外科主任医师。1995年毕业于同济医科大学，2006年获得博士学位，2006年在上海交通大学器官移植中心博士后，晋升副主任医师,2010年晋升副教授，硕士研究生导师，担任上海市普外科学会青年委员，美国胰腺病学会会员，国际胰腺病学会会员，中国研究型学会胰腺病青年委员。上海中西医结合胰腺病委员会委员，上海市中西医结合胆胰学组秘书长兼委员，《世界华人消化杂志》编委，《临床外科杂志》编委，中华实验外科杂志通讯编委等10杂志编委和审稿专家，国家自然科学基金评审专家，上海市自然科学基金评审专家，2014.2-2015.6美国密歇根大学癌症中心，胰腺癌中心访问学者，师从美国外科学会主席，美国胰腺病学会主席Simeone教授，从事大量的临床、手术及基础研究。主持国家自然科学基金面上项目3项，主持完成省市科技攻关重点项目5项，发表SCI文章20篇，国内权威杂志40余篇，核心期刊20余篇。

擅长：

复杂胰腺、胆道、肝脏外科疾病的诊治。腹腔镜胰十二指肠切除术，腹腔镜肝切除，腹腔镜胰体尾切除术。