森贝伽生物：快来get细胞污染方法

细胞污染是我们在培养时最不愿意遇到却又或多或少无法避免的问题，今天我们就来聊 -聊细胞的污染类型。

细胞污染其实是一个广义的说法，我们认为只要是混入细胞的培养环境中会对细胞生存,

有害的成分以及造成我们细胞培养不纯的异物都应该被视作污染。

细胞污染一般不能够被完全消除，

但我们能够通过我们的操作等外理减少细服污染发生的频率和降低细胞污染后果的严重性。

支原体污染

1. 大小0.1~0.3um左右，一般肉眼显微镜难以观察；

2. 结构简单，需要依附宿主细胞，可与细胞共存；

3. 无细胞壁，一般抗生素作用不了。

支原体污染后变化

1. 多数细胞在形态上少有明显变化

2. 培养液中碎片增加

3. 细胞生长缓慢，易聚团

4. 镜下观察有不动的小黑点培养液不变浑浊，但很快变为黄色

支原体污染电镜图

（正常的牛源细胞系MDBK）

（受到支原体污染的MDBK细胞）

支原体污染检测方法

1. CR检测法
2. 受到支原体污染的MDBK细胞法
3. 支原体培养法
4. 相差显微境检测
5. 支原体检测试剂盒

细胞污染处理办法

细菌污染

预防细菌污染一般用双抗生素；

污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液，此法在污染早期有效。

真菌污染

预防真菌污染一般是培养体系中加入三抗；

污染后建议丢弃细胞，彻底消毒灭菌细胞房和CO2培养箱，扔掉可能被污染的培养基，对用过的实验器材进行灭菌。

支原体污染

1. 细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤。

2. 根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放在 41℃作用 4~5 小时，最长不超过18小时，以杀灭支原体。但高温对细胞生长本身有影响。

3. 建议在实验前先用少量细胞摸索最适合的温度和时间，尽可能保证杀灭支原体而细胞本身又不受损伤。

4. 使用支原体清除试剂

毒性低：选用天然抗生素，对细胞毒性小，不影响后续细胞实验；

操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；

起效快、周期短：最快3天即可见效，一个周期（大约7天）即可清除干净；

稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用；

去除范围广：几乎能去除所有类型的支原体。

在任何情况下，完全去除细胞中的微生物污染是及其困难的!过度使用抗生素可能产生更强抗性的菌株，撤药后极易复发。

对于易重新获得的细胞株，建议直接处理培养物，防止污染扩散！同时重新以新批次细胞进行实验，节约时间，减少风险。