该篇实验方法已经在Plant, Cell＆Environment文章“Shoot tolerance mechanisms to iron toxicity in rice (Oryza sativa L.)”中验证过。原作者将该方法的详细版本发表在Bio-protocol 期刊，欢迎大家进入Bio-protocol 期刊直接与作者交流。

简 介

在这篇Bio-protocol文章中，来自德国吉森大学的研究人员详细描述一种可以高通量分析比较不同水稻幼苗之间参与抗坏血酸转化途径的关键酶的差异。

亮 点

1. 本方法基于96孔酶标仪，能够在一次测试中测量超过8个具有技术复制的样品，克服了依赖于比色皿分光光度计方法中低通量的限制，大大提升了测量的效率。

2. 本方法提供了一种高通量测量技术，不仅适用于水稻幼苗，还可以用于研究其他植物物种中与抗坏血酸周转相关的酶的活性。

背景介绍

L-抗坏血酸 (AsA, 维生素C) 是参与植物光合作用、激素生物合成和非生物胁迫耐受性的最丰富的水溶性抗氧化剂。在光合作用中，AsA通过抗坏血酸过氧化物酶(APX)充当光合电子载体的氧化还原状态调节剂。抗坏血酸氧化酶(AO) 催化AsA氧化为单脱氢抗坏血酸，后者进一步歧化为脱氢抗坏血酸 (DHA)和AsA。MDHA和DHA可以分别通过单脱氢抗坏血酸还原酶 (MDHAR)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)回收到AsA 中。一些报告显示了这些酶在植物发育和胁迫耐受性中的关键作用。因此，研究人员需要可靠和快速的检测方案来研究它们在植物发育和应激反应过程中的酶活性。

步骤节选

step A. Grow rice plants in the climate-controlled glasshouse

Figure 2. Representative photos summarizing the working procedure described in this protocol.

step B. AO activity assay for the soluble and ionically bound fraction

step C. APX and MDHAR activity assay

step D. DHAR activity assay

Figure 3. Summary of the assay steps for ascorbate-turnover enzyme activities described in this protocol.

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原文链接：https://s.bio-protocol.org?s=1f971453f955d22d

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