如何构建稳定细胞株？构建方法及注意点

实验中很多情况下我们都要用到稳定细胞系，但质粒建系时间长，成功率低，很多时候耗时半年还不见成效，眼看别人实验都收尾了，自己这边却还没有动静，耗在上面的时间精力足够写一篇血泪史！

但是现在不用担心！

今天我们就来聊一聊，要稳定建系并且更好！

稳定转染，即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。

瞬时转染的表达，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，，导致最后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染。

那么在什么情况下我们需要构建稳定株呢？

1、一般如下情况需要构建稳定株

• 长期在目的细胞中研究，通过构建稳定株，可以大大或者病毒，也极大方便实验研究；

• 部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的

• 瞬转往往会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，构建稳定株可以帮助进行实验研究；

• 需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；

• 需要用细胞的，比如裸鼠成瘤等，往往需要构建成稳转株

2、构建稳定株的方法

其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的，但这些方法整合入基因组的效率极低，很难成功。而可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，是建立稳定株的最优方式。

3、构建稳定株的注意点

稳定株构建是个长期过程，从质粒构建到慢病毒包装，再到细胞感染及后期的筛选，每一步都至关重要，所以建立稳转株花个半年时间，也是常有的事，而且要承担病毒包装不成功，细胞感染效率低等风险。

所以，想要短期内高效构建出稳定细胞株，就不要错过汉恒提供的“三严”稳转株构建服务：

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